1、将插入片段完整序列输入至第一个文本输入框内（非ATCG字符将被自动过滤）。

2、勾选“是否需要在片段两端添加酶切位点”选项。如果选择“是”则在下部酶切位点下拉选项中选择需要添加的酶切位点名称。

3、点击“生成CE Entry扩增引物”按钮，按钮下面的文本框内即为该插入片段完整正反向扩增引物。每条引物包含重组序列（小写）和特异性扩增序列（大写）两部分。

4、点击“清空”按钮，继续设计另外一个插入片段的CE Entry克隆引物。

注：因部分酶切位点包含兼并序列，因此，当选择添加酶切设计方案时引物中酶切位点序列中可能出现兼并碱基，此时需自行根据下述转换原则替换兼并碱基序列：M=A or C；R=A or G；W=A or T；S=C or G；Y=Cor T；K=G or T；V=A or C or G；H=A or C or T。