1.依次将突变位点上游序列输入左侧文本框、突变位点突变后的序列输入中部文本框、突变位点下游序列输入右侧文本框。方向均为5'至3',仅须输入正义链序列即可。
2.点击“生成Mut Express II单点突变扩增引物”按钮,下方文本框内即为突变位点扩增引物(引物中小写序列即为突变序列)。
3.点击“清空”按钮,继续设计另一个单点突变扩增引物对。
注意:
1.突变位点是指目标DNA序列中小于50 bp的一个位置,可以是一个碱基、也可以是多个碱基。
2.向中部文本框输入的突变位点突变后的序列应尽可能短一些,这样可以显著缩短扩增引物的长度。如进行单碱基突变,只需输入一个碱基即可;如进行连续或不连续的多个碱基突变时,例如将NNNaNNNcNNtNNNN序列中的ACT碱基全部突变为G,则将gNNNgNNg输入中部文本框即可。
3.如中部文本框未输入任何序列,可实现左侧文本框序列和右侧文本框序列的无缝拼接,可用于进行载体特定序列的删除。
4.请务必保证:左侧文本框序列+中部文本框序列+右侧文本框序列=完整的突变后序列!否则突变完成后会出现碱基缺失或冗余等错误。
5.不可用于双/多位点突变引物设计。